動物疫病檢測常用技術,按檢測目標可分為兩大類:病原學檢測(查病原體本身)和血清學檢測(查抗體,反映感染/免疫狀態);再按技術原理與應用場景,可分為快速篩查技術、精準確診技術和傳統經典技術。下面按實用性和普及度,從常用到專業,逐一說明。
一、病原學檢測技術(直接查病毒/細菌/寄生蟲等)
1.快速篩查類(現場/基層首選,快、簡、成本低)
(1)膠體金免疫層析技術(試紙條/快速卡)
原理:抗原-抗體特異性結合,在膜上形成可見色帶。
常用疫?。悍侵挢i瘟、口蹄疫、豬瘟、藍耳、新城疫、禽流感、布病、弓形蟲等。
特點:
優點:10–20分鐘出結果、無需儀器、操作簡單、適合現場/基層初篩。
缺點:靈敏度/特異性低于PCR,不能單獨作為重大疫病確診依據,僅用于初篩。
判定:C線(質控)+T線(檢測)顯色=陽性;僅C線=陰性;C線不顯色=無效。
(2)普通PCR(常規PCR)
原理:體外擴增病原特異性核酸片段,電泳觀察條帶。
常用疫?。憾鄶挡《静。ㄘi瘟、藍耳、禽流感、新城疫、口蹄疫等)、細菌?。ú疾?、副豬嗜血桿菌等)。
特點:
優點:靈敏度高、特異性強,可區分病原型/亞型。
缺點:需PCR儀+電泳,耗時約2–4小時,不能定量。
判定:出現與陽性對照一致的特異性條帶=陽性;無條帶=陰性。
2.精準確診類(實驗室核心,用于復核/確診/定量)
(1)實時熒光定量PCR(qPCR/Real-timePCR)
原理:PCR過程中實時監測熒光信號,通過Ct值判定并定量。
常用疫?。悍侵挢i瘟、口蹄疫、高致病性禽流感、豬瘟、藍耳、偽狂犬、細小病毒等重大/優先防控疫病。
特點:
優點:靈敏度最高、特異性強、可定量、防污染、結果客觀,是目前病原檢測金標準級技術。
缺點:儀器昂貴、試劑成本高、需專業人員。
判定:Ct≤規定閾值(如35/38)=陽性;Ct>閾值=陰性;臨界Ct=疑似,需復檢。
(2)數字PCR(dPCR)
原理:將反應體系微滴化,單分子擴增,絕對定量。
應用:極低載量病原檢測(如早期感染、潛伏感染)、病毒載量精確定量、轉基因/病原分型。
特點:比qPCR更靈敏、抗干擾強,但成本更高,多用于科研/精準診斷。
(3)病毒分離/細菌分離培養
原理:用細胞/雞胚/培養基培養病原,觀察CPE(細胞病變)/典型菌落,再鑒定。
常用疫?。?/div>
病毒:口蹄疫、禽流感、新城疫、豬瘟、藍耳等(需細胞/雞胚)。
細菌:豬鏈球菌、副豬嗜血桿菌、大腸桿菌、沙門氏菌、布氏桿菌等(需培養基)。
特點:
優點:獲得活病原,是確診金標準,可用于致病性試驗、疫苗研發、藥敏試驗。
缺點:耗時最長(病毒3–7天,細菌1–3天)、操作復雜、生物安全要求高。
判定:出現典型CPE/菌落+生化/血清/分子鑒定確認為目標病原=陽性;盲傳2–3代無陽性=陰性。
(4)基因測序(一代/二代測序)
原理:測定病原核酸序列,與數據庫比對,確定病原種類/亞型/變異株。
應用:病原鑒定、分型、溯源、變異監測(如禽流感H5/H7亞型、口蹄疫型/亞型、非洲豬瘟變異株)。
特點:結果最準確,可發現新病原/變異株,但成本高、周期長(1–3天),多用于疫情溯源與科研。
3.其他病原學技術
(1)免疫熒光技術(IFA/間接免疫熒光)
原理:熒光標記抗體與病原結合,熒光顯微鏡下觀察特異性熒光。
應用:病毒(如豬瘟、藍耳、偽狂犬)、細菌(如布病)的細胞/組織切片檢測,可定位病原。
特點:特異性強,可直觀觀察病原位置,需熒光顯微鏡。
(2)免疫組化(IHC)
原理:酶標記抗體,顯色反應定位組織中的病原。
應用:病理組織中病原定位(如非洲豬瘟、豬瘟、偽狂犬的組織檢測),結合病理診斷。
(3)電鏡技術(EM)
原理:電子顯微鏡直接觀察病毒形態。
應用:未知病毒初步鑒定、病毒形態學觀察(如冠狀病毒、輪狀病毒)。
特點:直觀,但靈敏度低、設備昂貴、操作復雜,多用于科研。