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鼠抗重金屬類單克隆抗體的制備方法介紹

 更新時間:2022-07-15    點擊量:578
  鼠抗重金屬類單克隆抗體的制備方法
 
  1、制膠及上樣
 
  (1)配制12%SDS-PAGE分離膠,混勻后注入邊條厚度為2mm的兩塊潔凈玻璃板間,其上加一薄層異丙醇,室溫下靜置至凝固。
 
  (2)待分離膠*聚合后,傾去其上的水層,以吸水紙吸凈殘余液體,插入加樣梳,緩緩加入濃縮膠,使其充滿加樣梳間的空隙,室溫下靜置。待膠*聚合。
 
  (3)將凝膠固定于電泳裝置上,上、下槽加入電泳緩沖液。
 
  (4)小心拔去加樣梳,使加樣孔豎直,以電泳緩沖液沖洗加樣孔數次。
 
  (5)分別取50µg蛋白量的細胞總蛋白樣品及蛋白質分子量Marker,按4:1體積比加入5´樣品緩沖液,以1´樣品緩沖液?配平上樣體積后,于沸水浴中煮3min使蛋白變性。
 
  (6)將處理好的樣品按照預定的順序加入分離膠的上樣孔中。
 
  2、電泳
 
  (1)接通凝膠電泳儀的電源,初始電壓70V。
 
  (2)溴酚藍染料的前緣進入分離膠上緣后提高電壓至160V,繼續電泳直至溴酚藍泳出分離膠的下緣。(約60分鐘)
 
  3、轉膜
 
  (1)從玻璃板中取出凝膠,將其浸泡于轉移緩沖液中。
 
  (2)取與膠同樣大小的硝酸纖維素膜,以95%乙醇浸泡5秒鐘后浸泡于轉移緩沖液5分鐘以上待用。
 
  (3)按順序在轉移夾內放置預先經轉移緩沖液浸泡的海綿、三層濾紙、硝酸纖維素膜、凝膠、三層濾紙、海綿,保證每層之間沒有氣泡。
 
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