小鵝瘟病毒PCR檢測試劑盒說明書

【用途】 用于小鵝瘟病毒核酸的檢測。

【試劑】

【小鵝瘟病毒PCR檢測試劑盒說明書操作步驟】

1.樣本前處理及核酸提取  

樣本前處理：

取適量病料心、肝、腸等組織，于滅菌研缽充分研磨，用PBS按照1：3體積稀釋成均勻乳劑，經(jīng)10 000rpm離心3 min。

核酸提取：

(1)取200μL上述樣本離心后上清液和10μL蛋白酶K加入一只新的1.5mL離心管,然后加入200μL裂解液，劇烈振蕩。(蛋白酶K開蓋使用后建議存于2-8℃)混勻5～10秒。

(2)56℃溫浴10分鐘。

(3)在上述離心管中加入200μL無水乙醇，充分振蕩混勻5～10秒。

(4)將步驟3中混勻的液體轉(zhuǎn)移至一只套有收集管的純化柱上，10 000rpm離心1分鐘，棄去套管內(nèi)液體。

(5)將500μL去蛋白漂洗液加入純化柱上，10 000rpm離心1分鐘，并棄去套管內(nèi)液體。

(6)將700μL洗滌液加入純化柱上，10 000rpm離心1分鐘，并棄去套管內(nèi)液體。

(7)可選：重復(fù)步驟（6）。

(8)再將純化柱放回接液管上，13 000rpm離心1分鐘。

(9)將純化柱移到一只干凈的1.5mL離心管中。

(10)向離心柱內(nèi)加50μL洗脫液，室溫靜置1分鐘后12 000rpm離心1分鐘，棄純化柱，離心管內(nèi)液體中含有基因組DNA。提純的基因組DNA如果不立即使用，請保存于-20℃。

2. PCR加樣體系（總體系20 μL）：將下列試劑加入PCR反應(yīng)管中。

（注：陰、陽性對照設(shè)立，由試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品直接替換“模板"即可。）

3. 反應(yīng)程序

4. 電 泳

配制1%瓊脂糖凝膠，取PCR產(chǎn)物5uL，加樣于凝膠孔中，同時在相鄰孔加3μl DL2000 DNA Marker，在120v-130v 電壓下，1×TAE液中電泳15-20min，在紫外成像儀下觀察結(jié)果。

【結(jié)果判定】

   在372b左右位置出現(xiàn)擴增帶，核酸檢測為陽性（如圖）。

   在372b左右位置未出現(xiàn)擴增帶，核酸檢測為陰性 。                        

1.B盒使用之前請*溶解并離心數(shù)秒后使用，蛋白酶K開蓋使用后建議保存于2-8℃。

2 反復(fù)凍融試劑將降低檢測靈敏度，盡量減少反復(fù)凍融。

3 為避免樣本間的交叉污染，模板最后加，加模板時先加陰性對照，再加檢測樣品，最后加陽性對照，有條件的實驗室加模板的移液器應(yīng)與加其它組份的移液器分開。

4 上機前注意檢查確保反應(yīng)混合液內(nèi)無氣泡，且反應(yīng)管蓋緊。

【生產(chǎn)企業(yè)】  

企業(yè)名稱：山東綠都生物科技有限公司

生產(chǎn)地址：山東省濱州市經(jīng)濟開發(fā)區(qū)黃河二路169號綠都生物工程高科技園

【有效期】本制品有效期為1年，生產(chǎn)日期見包裝內(nèi)側(cè)。

僅供獸醫(yī)診斷使用

長期提供原核、真核蛋白表達構(gòu)建服務(wù)

長期 提供抗原偶聯(lián)、 HRP、生物素、糖基化、親和素、FITC等偶聯(lián)標(biāo)記多肽、抗體、抗原、蛋白等服務(wù)