RNA核酸免提取試劑盒

試劑盒應(yīng)用

本試劑盒采用zhuan利裂解液配方，有針對(duì)性的從組織、培養(yǎng)細(xì)胞、拭子、血液、尿液、唾液、環(huán)境樣本中獲得病毒RNA。裂解、提取和純化只需10分鐘。該配方中添加RNA保護(hù)劑，能夠抑制RNA降解、保護(hù)RNA完整，從而提高RNA產(chǎn)量。提取后的RNA可直接用于RT-PCR、RT-qPCR、分子克隆、文庫(kù)構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。

試劑盒組成

備注：第一次使用前，在洗滌液VRII中加入48mL無(wú)水乙醇，并標(biāo)記“√"和時(shí)間，避免重復(fù)加入。

保存條件

室溫保存一年。

自備材料

水浴鍋或金屬浴、無(wú)水乙醇、1.5mL無(wú)RNase離心管

使用方法

1. 樣本處理方法

1.1 從動(dòng)物組織中提取

1.1.1 取20-100mg組織樣本放入液氮中充分研磨，加入700μL裂解液VR，顛倒混勻。

或者取20-100mg組織樣本加入700μL裂解液VR，加入1顆鋼珠，放入組織研磨器中，研磨1-2分鐘。

1.1.2 55℃孵育1分鐘。12,000rpm離心1分鐘。

1.1.3 取500μL上清加入250μL無(wú)水乙醇，充分混勻。按照步驟2.1-2.7進(jìn)行操作。

1.2 從懸浮細(xì)胞中提取

1.2.1 細(xì)胞1,000rpm離心5分鐘，收集細(xì)胞沉淀。

1.2.2 細(xì)胞數(shù)量<5×10⁶個(gè)時(shí)，加入500μL裂解液DV。細(xì)胞數(shù)量為5×10⁶~1×10⁷個(gè)時(shí)，加入700μL裂解液VR。輕輕吹打混勻，55℃孵育1分鐘。

1.2.3 12,000rpm離心1分鐘。

1.2.4 細(xì)胞數(shù)量<5×10⁶個(gè)時(shí)，取450μL上清。細(xì)胞數(shù)量為5×10⁶~1×10⁷個(gè)時(shí)，取650μL上清。

1.2.5 加入0.5倍體積無(wú)水乙醇，充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

1.3 從貼壁細(xì)胞中提取

1.3.1 yimei消化細(xì)胞后1,000rpm離心5分鐘，收集細(xì)胞沉淀。

1.3.2 細(xì)胞數(shù)量<5×10⁶個(gè)時(shí)，加入500μL裂解液DV。細(xì)胞數(shù)量為5×10⁶~1×10⁷個(gè)時(shí)，加入700μL裂解液VR。輕輕吹打混勻，55℃孵育1分鐘。

1.3.3 12,000rpm離心1分鐘。

1.3.4 細(xì)胞數(shù)量<5×10⁶個(gè)時(shí)，取450μL上清。細(xì)胞數(shù)量為5×10⁶~1×10⁷個(gè)時(shí)，取650μL上清。

1.3.5 加入0.5倍體積無(wú)水乙醇，充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

1.4 從血液、尿液、唾液、細(xì)胞上清液中提取

1.4.1 300μL樣本中加入500μL裂解液VR。顛倒混勻，55℃孵育1分鐘。

1.4.2 加入400μL無(wú)水乙醇，上下顛倒混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

1.5 從拭子中提取

1.5.1 拭子置于700μL裂解液VR中，顛倒混勻，55℃孵育1分鐘。

1.5.2 加入350μL無(wú)水乙醇，上下顛倒混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

2. 提取步驟

2.1 1全部加入RNA吸附柱中（如有需要可離心兩次），12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中廢液。

2.2 向RNA吸附柱中加入500μL洗滌液VRI，12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中廢液。

2.3 向RNA吸附柱中加入500μL洗滌液VRII，12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中廢液。

2.4 重復(fù)步驟2.3一次。

2.5 12,000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中廢液。

2.6 將RNA吸附柱放入新1.5mL無(wú)RNase離心管中，加入30-50μL洗脫液VR，室溫放置1分鐘。     

2.7 12,000rpm離心2分鐘，得到RNA溶液，-80℃保存。

注意事項(xiàng)

1、務(wù)必在超凈臺(tái)中進(jìn)行操作，常換手套，防止RNA降解。

2、盡可能使用新鮮樣本進(jìn)行RNA提取。

3、使用無(wú)DNase無(wú)RNase的吸頭和離心管，防止RNA降解，常更換吸頭，防止交叉污染。

4、為了提高洗脫效率，可提前將洗脫液VR置于65℃水浴后再使用。