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快速病毒DNA/RNA免核酸提取PCR檢測試劑盒
試劑盒簡介：本試劑盒中采用du特配方，能夠快速高效的裂解各種常見樣本，無需重復離心便可獲得高質量的病毒DNA/RNA。該DNA/RNA無需進行純化可以直接用于PCR的高特異性檢測。本產品可用于細胞培養液、血液、血清中病毒DNA/RNA的提取。2×one step RT- PCR Mix試劑中引入了dUTP/UDG防污染系統，可消除擴增污染對RT-PCR的影響。
組分 | M-DNA01 |
DNA/RNA-Lysis | 1.5 mL （50T） |
2×PCR Mix | 500 μL ( 50T ) |
2×one step RT- PCR Mix | 500 μL ( 50T ) |
one step Enzyme Mix | 50 μL ( 50T ) |
樣品稀釋液 | 20 ml ( 50T ) |
保存期：-20oC 保存，保存期一年。
注意：使用前將DNA/RNA-Lysis室溫充分混勻。
一、 樣品的處理方法
1.少量樣本處理方法
（1）吸取15μL樣本放入1.5ml離心管中。
（2）加入25 μL DNA/RNA Lysis。
（3）充分混勻,室溫靜置5分鐘，加入350µL樣品稀釋液混勻。
（4）10,000rpm離心1分鐘，取1-2μL作為PCR反應模板。
2.大量樣本處理方法
（1）分別吸取15μL不同的樣本依次放入8聯管中。
（2）加入25 μL DNA/RNA Lysis。
（3）充分混勻,室溫靜置5分鐘，10,000rpm離心1分鐘。
（4）分別從（3）中吸取10μL處理后樣品依次加入一新的8聯管。
（5）每孔分別加入90µL樣品稀釋液混勻。取1-2μL作為熒光PCR反應模板。
二、以DNA為模板的PCR反應體系及反應程序
PCR反應體系 | 20 μL體系（推薦） |
2× PCR Mix | 10 μL |
Forward Primer (10 μM) | 0.4-1μL |
Reverse Primer (10 μM) | 0.4-1 μL |
Template DNA | 1 μL |
ddH2O | 補足至20 μL |
溫度 | 時間 | 循環數 |
95oC | 3min | 1 |
95oC | 15sec |
35-40 |
Tm | 30sec | |
72oC | 1min/kb | |
72oC | 5-10 min | 1 |
4oC | -- | 1 |
三、以RNA為模板的PCR反應體系及反應程序
PCR反應體系 | 20 μL體系（推薦） |
2×one step RT- PCR Mix | 10μL |
one step Enzyme Mix | 1μL |
Forward Primer (10 μM) | 0.4-1μL |
Reverse Primer (10 μM) | 0.4-1 μL |
Template RNA | 1-2 μL |
ddH2O | 補足至20 μL |
溫度 | 時間 | 循環數 |
50oC | 30min | 1 |
94oC | 3min | 1 |
94oC | 30sec |
35-40 |
Tm | 30sec | |
72oC | 0.5-1min/kb | |
72oC | 7min | 1 |
4oC | -- | 1 |
（1）在進行大量樣品檢測時，可將本試劑盒的試劑預分裝到8聯 PCR管，用多通道移液器進行多樣本的處理。
（2）取樣的細胞量應當適中，濃度不宜過高或過低，處理后溶液應當以透明為宜。擴增病毒基因時需要根據病毒的滴度決定取樣的細胞數量。
（3）樣品處理過程中應當防止交叉污染，推薦設置陰性樣品參與處理過程，以檢測環境的污染。
（4）PCR的退火溫度可根據引物的預測Tm值減去5℃，或者通過梯度PCR摸索最佳退火溫度。
（5）用本試劑盒處理的樣品可于-20℃保存 1個月。
（6）為防止試劑盒污染，請勿將不同批號試劑盒混用。
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武經理
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